Agar cetrimida: fundamento, preparación, usos

El agar cetrimida o cetrimide es un medio de cultivo sólido selectivo, diseñado para el aislamiento de Pseudomonas aeruginosa. Está basado en poner en evidencia la producción de pigmentos característicos de esta especie y fue elaborado a partir de la modificación del agar Tech, creado por King, Ward y Raney.

La fórmula original contenía sales de cloruro de magnesio, sulfato de potasio, digestión pancreática de gelatina y agar-agar. La modificación de la fórmula consistió en el agregado de cetrimida (bromuro de cetil trimetil amonio) y glicerol.

Agar cetrimida
Agar cetrimida sembrado con Pseudomonas aeruginosa Fuente: BiotechMichael [Public domain], from Wikimedia Commons

El agar cetrimida es útil para el estudio microbiológico de muestras en donde se sospeche la presencia de Pseudomonas aeruginosaCabe destacar que esta bacteria es de suma importancia, pues aunque forma parte de la microbiota normal ambiental, con frecuencia se comporta como un patógeno oportunista.

Por ello, uno de los problemas más comunes originados por este germen son las infecciones nosocomiales, es decir, aquellas que se producen dentro del ambiente hospitalario, atacando a los pacientes que tienen un sistema inmunológico deprimido.

Por otra parte, debido a la afinidad que tiene este microorganismo con la humedad, los blancos de contaminación más vulnerables son: equipos de respiración asistida, medicamentos, nebulizadores, fuentes de agua, aires acondicionados, desinfectantes, soluciones jabonosas, soluciones inyectables, heridas abiertas, catéteres, sondas urinarias, entre otros.

En este sentido, el agar cetrimida es útil para realizar controles microbiológicos y cultivos a los elementos anteriormente nombrados.

Fundamento

El agar cetrimida se fundamenta en la capacidad que tiene el medio para favorecer el crecimiento de P. aeruginosa, estimular la producción de sus pigmentos y a su vez inhibir el crecimiento de otros microorganismos.

Estas propiedades se deben a la función que cumplen cada uno de sus componentes. La peptona de gelatina presente sirve como fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. El  glicerol o glicerina funciona como fuente de carbono.

Por su parte, la cetrimida (bromuro de cetil trimetil amonio) es la sustancia que inhibe el crecimiento de otras bacterias diferentes a P. aeruginosa, incluyendo otras especies pertenecientes al mismo género.

La inhibición se produce porque la cetramida actúa como un detergente catiónico, logrando desestabilizar la membrana plasmática de la mayoría de las bacterias, a excepción de P. aeruginosa y algunas otras que logran sobrevivir.

Por otra parte, contiene cloruro de magnesio y sulfato de potasio. Estos compuestos estimulan la expresión fenotípica relacionada con la capacidad de Pseudomonas aeruginosa de producir diversos pigmentos, entre ellos: piocianina, pioverdina, piorrubina, piomelanina y fluoresceína. Finalmente, contiene agar-agar, que le da la consistencia sólida.

Interpretación

La interpretación del crecimiento obtenido en este agar se realiza de la siguiente manera:

La observación de colonias redondas, lisas, de bordes regulares, con producción de pigmentos azul-verdoso, verde, marrón o rojizo, más la emisión de olor frutal (aminoacetofenona), es un resultado presuntivo de la presencia de esta bacteria en dicha muestra.

Por otra parte, es indicativo de P. aeruginosa la observación de un pigmento amarillo-verdoso brillante sobre las colonias cuando la placa es expuesta a luz ultravioleta.

Agar cetrimida con fluorescencia.
Fluorescencia de las colonias de P. aeruginosa en agar cetrimida bajo la luz ultravioleta.

Cabe destacar que cada color observado se debe a la producción de un pigmento específico. El pigmento azul-verdoso corresponde a la producción de piocianina, el verde a pioverdina, el rojizo a piorrubina, el marrón  a piomelanina y la fluorescencia amarillo- verdosa brillante debajo de la luz ultravioleta a fluoresceína.

Preparación

Pesar 43 gr del medio deshidratado y disolver en agua destilada. Agregar 10 ml de glicerol. Lleve la mezcla a una fuente de calor. Deje hervir por unos minutos hasta la disolución completa.

Autoclave a 121°C por 15 minutos. Deje reposar y sirva en placas de Petri estériles cuando la temperatura esté en 50°C aproximadamente.

Dejar solidificar, invertir, ordenar en plaqueros y guardar en nevera hasta su uso. Para sembrar las placas de agar cetrimida se deben sacar de la nevera con antelación y dejar que tome temperatura ambiente.

El pH final del medio debe quedar en 7,2 ± 0,2.

El color del medio deshidratado es beige y el preparado es blanco opaco.

Usos

En el agar cetrimida se pueden sembrar todo tipo de muestras en la que se sospeche la presencia de Pseudomonas aeruginosa. Por tanto, es útil en todas las áreas de la microbiología (ambiental, industrial, clínica, de agua y alimentos).

Es de gran importancia para analizar ambientes hospitalarios y así poder aplicar las mediadas correctivas, ya que este microorganismo llega a los pacientes a través de equipos, medicamentos, soluciones e insumos contaminados que son utilizados por el paciente.

De esta manera, el microorganismo puede infectar el tracto respiratorio inferior, tracto urinario y heridas de pacientes inmunosuprimidos.

También se pueden hacer recuentos de colonias de P. aeruginosa en pruebas de límite microbiano.

Sembrado

El agar cetrimida puede utilizarse como cultivo primario. La placa se inocula en uno de sus bordes y de allí se distribuye por agotamiento al resto de la placa. Las muestras líquidas  se pueden sembrar por superficie con espátula de drigalski.

Las placas se incuban en aerobiosis a 37°C por 24 horas de incubación.

Limitaciones

-Un pequeño porcentaje de cepas de  Pseudomonas aeruginosas no producen piocianina, por lo que se puede interpretar un falso negativo.

-Algunas especies de Pseudomonas de importancia clínica son inhibidas en este medio.

-A pesar de observar las características descritas para Pseudomonas aeruginosa, se deben corroborar con pruebas adicionales de identificación. Un ensayo que no debe faltar es la prueba de oxidasa, la misma debe dar positiva.

-Algunas enterobacterias pueden crecer en este medio y desarrollar un pigmento amarillo, pero se diferencia de Pseudomonas aeruginosa en que al someter la placa a luz ultravioleta no hay fluorescencia.

Serratia marcescens logra desarrollarse y produce un pigmento rosado.

-Si las placas sembradas de agar cetrimide son expuestas por un tiempo a temperatura ambiente, las cepas de P. aeruginosa pueden perder la fluorescencia observada debajo de la luz ultravioleta, sin embargo la propiedad es recuperada si se vuelve a incubar a 37°C.

Control de calidad

Para analizar el buen funcionamiento del agar cetrimida se pueden usar cepas controles, tales como: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 y Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Los resultados esperados son:

  • Para P. aeruginosa buen crecimiento, con pigmento azul-verdoso y fluoresceína positiva.
  • S. maltohilia y S. aureus serán inhibidas de forma parcial a completa.
  • Se espera que Escherichia coli sea inhibida completamente.

Referencias

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Caracterización fenotípica y serológica de aislamientos clínicos de Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Laboratorios Conda Pronadisa. Base de agar cetrimida. 2014. Disponible en: condalab.com
  3. Laboratorios Britania. Cetrimida agar. 2015. Disponible en: britanialab.com
  4. Laboratorios BD. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Disponible en: bd.com
  5. Laboratorio Francisco Soria Melguizo, C.A. Cetrimide agar. 2009. Disponible en: http://f-soria.es
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Bioanalista/Microbióloga, Especialista en Docencia para la Educación Superior y Magíster en Tecnología Educativa. Docente en la Escuela de Medicina de la Universidad de Carabobo, Venezuela. Miembro de la Sociedad Venezolana de Microbiología.

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