¿Qué es el agar Vogel-Johnson?
El agar Vogel-Johnson es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial, especialmente formulado para el aislamiento de Staphylococcus aureus. Este medio fue creado por Vogel y Johnson en 1960 a partir de la modificación del agar telurito glicina formulado en 1955 por Zebovitz, Evans y Niven.
La modificación consistió en aumentar la concentración de manitol presente en el medio y en la incorporación de un indicador de pH. La fórmula actual está compuesta por tripteína, extracto de levadura, manitol, fosfato dipotásico, cloruro de litio, glicina, rojo de fenol, agar, solución de telurito de potasio al 1% y agua.
Cabe destacar que existen otros medios que, al igual que el agar Vogel-Johnson, son selectivos para el aislamiento de S. aureus, como el agar manitol salado y el agar Baird Parker. En este sentido, se podría decir que el fundamento del agar Vogel-Johnson es una combinación del agar manitol salado y el agar Baird Parker.
En el primero, las colonias de S. aureus se distinguen por fermentar el manitol y hacer virar el indicador de pH a amarillo. Por otra parte, en el segundo, el S. aureus se caracteriza por reducir el telurito a teluro y formar colonias grises a negras. Ambas propiedades son observadas en el agar Vogel-Johnson.
Este medio, al igual que sus homólogos, es útil para la detección de Staphylococcus aureus en muestras de alimento, controles sanitarios de productos industriales y en muestras clínicas.
Fundamento
Aporte de nutrientes
El medio Vogel-Johnson contiene tripteína y extracto de levadura. Ambas sustancias proporcionan aminoácidos de cadena larga que sirven como fuentes de carbono y de nitrógeno necesarios para el crecimiento bacteriano. Las bacterias capaces de crecer en este medio tomarán los nutrientes de estas sustancias.
Poder selectivo
El agar Vogel-Johnson es capaz de inhibir el crecimiento de bacterias gramnegativas e incluso algunas grampositivas, favoreciendo el desarrollo de los estafilococos coagulasa positivos. Las sustancias inhibidoras son el telurito de potasio, el cloruro de litio y la glicina.
Poder diferencial
Las sustancias que hacen a este medio diferencial son el manitol y el telurito de potasio. El manitol es un carbohidrato, y cuando es fermentado se producen ácidos que hacen virar el medio de rojo a amarillo, lo cual sucede gracias a la presencia del indicador de pH rojo de fenol.
En tanto que el telurito incoloro, cuando es reducido a teluro libre metálico, toma un color gris oscuro a negro.
El Staphylococcus aureus fermenta el manitol y reduce el telurito a teluro. Por eso las colonias típicas de S. aureus en este medio son grises o negras rodeadas de un medio color amarillo.
Las bacterias que crecen en este medio y no reducen el telurito ni fermentan el manitol, formarán colonias transparentes rodeadas de un medio color rojo, incluso más intenso que el color original, debido a la alcalinización del medio por la utilización de las peptonas.
Por otra parte, las bacterias que reduzcan el telurito, pero no fermenten el manitol, crecerán como colonias grises o negras rodeadas de un medio color rojo intenso.
Si el medio se preparara sin la adición del telurito de potasio, las colonias de S. aureus se desarrollarían como colonias amarillas, rodeadas de un medio amarillo, tal como sucede en el agar manitol salado.
Balance osmótico y agente solidificante
El fosfato dipotásico mantiene el balance osmótico del medio y ajusta el pH a la neutralidad 7,2. Mientras que el agar le brinda la consistencia sólida al medio de cultivo.
Preparación
Solución de telurito de potasio al 1% p/v
Esta solución no viene incluida en el medio deshidratado, debido a que no puede ser esterilizada en autoclave. Por esta razón se prepara aparte y se agrega al medio ya esterilizado.
Algunas casas comerciales venden la solución de telurito de potasio al 1% lista para usar. Si se desea preparar en el laboratorio se procede de la siguiente manera:
Pesar 1.0 g de telurito de potasio y medir 100 ml de agua destilada. Disolver el telurito de potasio en una parte de agua y posteriormente completar la cantidad de agua hasta llegar a 100 ml. Esterilizar la solución por el método de filtración.
Medio base de agar Vogel-Johnson
Pesar 60 g del medio deshidratado, y disolver en 1 litro de agua destilada. Se calienta la mezcla hasta ebullición para ayudar a la disolución completa. Durante el proceso de disolución se agita el medio frecuentemente.
Esterilizar en autoclave a 15 libras de presión y 121 °C por 15 minutos. Sacar del autoclave y dejar reposar hasta que el medio alcance una temperatura aproximada de 45 a 50 °C. Adicionar 20 ml de la solución de telurito de potasio previamente preparada al 1%.
Mezclar y verter en placas de Petri estériles. Dejar que solidifique y ordenar de forma invertida en plaqueros para guardar posteriormente en nevera hasta su uso.
El pH final del medio preparado debe quedar en 7,2 ± 0,2.
Antes de sembrar una muestra se debe esperar a que la placa tome la temperatura del ambiente.
El color del medio preparado es rojo.
Usos
- Aunque puede ser utilizado para el aislamiento de S. aureus en cualquier tipo de muestras, es mayormente usado para el análisis microbiológico de productos farmacéuticos, cosméticos y alimentos. Se recomienda que el inóculo sea denso. El sembrado puede realizarse por estriamiento con asa de platino o por superficie con espátula de Drigalski. Las placas se incuban a 35-37 °C durante 24 a 48 horas en aerobiosis.
Control de calidad
Para realizar el control de calidad al medio Vogel-Johnson se pueden usar las siguientes cepas controles:
Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 o Proteus mirabilis ATCC 43071.
El resultado esperado es el siguiente: para las cepas de S. aureus, crecimiento satisfactorio con colonias negras rodeadas de medio amarillo. Para S. epidermidis, crecimiento regular con colonias translúcidas o negras rodeadas de medio color rojo.
Asimismo, para E. coli se espera que haya inhibición total, y para Proteus mirabilis, inhibición parcial o total. Si crece lo hará escasamente y las colonias serán negras rodeadas de medio color rojo.
Referencias
- VJ (Vogel and Johnson Agar). Recuperado de bd.com.
- Vogel-Johnson Agar. Recuperado de britanialab.com.