¿Qué es el agar XLD?
El agar XLD, o agar Xilosa Lisina Desoxicolato, es un medio de cultivo sólido, selectivo y diferencial para el aislamiento de enteropatógenos. Taylor diseñó la fórmula del agar XL (Xilosa, Lisina) con el fin de mejorar el aislamiento del género Shigella.
Observó que este género era inhibido en la mayoría de los medios destinados para el aislamiento de enteropatógenos. Posteriormente, se le adicionó desoxicolato sódico, tiosulfato de sodio y citrato amónico férrico para aumentar su selectividad. Esta fórmula ha resultado ser útil tanto para el aislamiento de Shigella, como de Salmonella.
El agar XLD está compuesto por extracto de levadura, desoxicolato de sodio, xilosa, lisina, lactosa, sacarosa, tiosulfato sódico, citrato férrico de amonio, cloruro sódico, rojo fenol y agar. En la mayoría de los laboratorios de bacteriología se usa el dúo agar XLD y agar SS para el estudio de muestras fecales en busca de Shigella y Salmonella.
Otros laboratorios prefieren la combinación de CHROMagar Salmonella y agar XLD, entre otras opciones disponibles. Estos dúos se pueden preparar en placas de Petri dobles. En un lado colocan agar XLD y en el lado opuesto el otro medio elegido.
Fundamento del agar XLD
Poder nutritivo
El agar XLD cuenta con el extracto de levadura, que sirve como fuente de nutrientes a los microorganismos que se desarrollan en este agar. Además, la presencia de carbohidratos (xilosa, sacarosa y lactosa) proporcionan energía a las bacterias que pueden fermentarlas.
Selectividad del medio
Como sustancia inhibidora presenta desoxicolato sódico, que impide el crecimiento de las bacterias grampositivas, dándole el carácter selectivo al medio.
Poder diferencial
Colonias típicas de Shigella
Como ya se ha mencionado, el agar XLD contiene xilosa, carbohidrato fermentado por todas las bacterias que crecen en este medio, a excepción del género Shigella.
Esta es una de las características que le brinda su carácter diferencial, ya que las colonias de Shigella se distinguen del resto por desarrollar colonias rojas, mientras que las demás bacterias producen colonias de color amarillo.
Colonias típicas de Salmonella
El género Salmonella también fermenta la xilosa, generando inicialmente colonias amarillas. Sin embargo, tras agotar la xilosa, ataca a la lisina por su enzima lisina descarboxilasa. La descarboxilación de la lisina genera álcalis, que hace virar el color de la colonia y el medio circundante a rojo original.
Este comportamiento solo es realizado por Salmonella, ya que los coliformes que descarboxilan la lisina no logran alcalinizar el medio. Esto es debido a que los coliformes también fermentan la lactosa y la sacarosa presentes, por tanto, la producción de ácidos es muy alta, quedando la colonia amarilla en estas bacterias.
Cabe destacar que el género Salmonella no fermenta la sacarosa, ni la lactosa.
Producción de H2S
El agar XLD también permite detectar especies de Salmonella productoras de H2S. Para ello cuenta con la fuente de sulfuro, representado por el tiosulfato de sodio, y un revelador de la reacción, que es el citrato férrico de amonio.
Este último reacciona con el H2S (gas incoloro) y forma un precipitado negro visible insoluble de sulfato de hierro. En este sentido, las características de las colonias de Salmonella serán rojas con un centro negro.
Cabe destacar que para que se dé la reacción de formación de H2S, se necesita un pH alcalino. Es por ello que otras enterobacterias que forman H2S no pueden hacerlo, o lo hacen pobremente en este medio, pues la alta acidez que producen al fermentar los carbohidratos presentes inhiben o dificultan la reacción.
Cloruro de sodio, agar y rojo de fenol
Finalmente, el cloruro de sodio mantiene el equilibrio osmótico, el agar es el agente solidificante y el rojo de fenol detecta los cambios de pH, haciendo virar el color de las colonias y del medio.
Preparación del agar XLD
- Pesar 55 gr de medio XLD deshidratado y disolver en 1 litro de agua.
- Calentar y agitar la mezcla hasta que llegue al punto de ebullición. No sobrecalentar, ya que el calor daña el medio y crea un precipitado que altera la morfología de las colonias típicas.
- Este medio no debe autoclavarse.
- Al disolver, se debe pasar a baño María a 50 °C. Al enfriar se debe servir directamente sobre placas de Petri estériles. Pueden verterse en placas sencillas o en placas dobles.
- Se dejan solidificar y se guardan en nevera hasta su uso.
- Atemperar antes de usar.
Como es un medio no esterilizado, se recomienda prepararlo cercano a la fecha de su uso. El pH final del medio debe quedar en 7,4 ± 0,2. El color del medio preparado es rojo naranja, traslúcido, sin precipitado.
Si se cuenta con el agar base Xilosa Lisina (XL) se le puede agregar desoxicolato de sodio, tiosulfato de sodio y citrato amónico de hierro. De esta manera se obtiene la fórmula del agar XLD.
Usos del agar XLD
El agar XLD se usa para la recuperación de enteropatógenos, principalmente del género Shigella y secundariamente del género Salmonella. Es útil para evaluar muestras de heces, agua y alimentos.
Tipos de muestra
Heces
- Las muestras de heces se pueden sembrar de forma directa en el agar XLD, realizando una buena distribución del material para obtener colonias aisladas.
- Para mejorar la recuperación de Salmonella se puede sembrar el agar XLD a partir de medios de enriquecimiento para Salmonella.
Alimento
- En el caso de alimentos se pueden usar caldos de enriquecimiento para Salmonella y para Shigella. Para Salmonella se puede utilizar caldo selenito cistina, caldo tetrationato verde brillante, entre otros. En el caso de Shigella, se puede enriquecer con el caldo Shigella con 0,5 µ/ml de novobiocina, incubado a 42°±1 °C por 16-20 horas.
Agua
- En los análisis de agua se recomienda la técnica de filtración con membrana y el uso de agar XLD, entre otros.
Condiciones de sembrado e identificación
- El medio sembrado se incuba en aerobiosis a 35 °C por 24 a 48 horas.
- Se observan las colonias típicas de cada género, a las colonias sospechosas se le deben realizar pruebas bioquímicas para su identificación.
Control de calidad
Para evaluar el control de calidad del medio se pueden usar las siguientes cepas bacterianas: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis, ATCC 13076, Salmonella abony, DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonnei ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.
El género Salmonella se caracteriza por presentar en este medio colonias rojas con centro negro, o colonias completamente negras. En tanto que, en el género Shigella, las colonias deben ser rojas, es decir, del color del medio.
En el caso de Escherichia coli se espera que sea inhibida total o parcialmente; si crece las colonias son amarillas. Para Proteus mirabilis se espera un crecimiento escaso con colonias rosadas con o sin centro negro. Finalmente, el género Klebsiella crecerá como colonias amarillas.
Referencias
- Enfermedades trasmitidas por alimentos. Shigellosis. Recuperado de anmat.gov.ar.
- Agar XLD. Recuperado de es.wikipedia.org.
- CHROMagar Salmonella / Agar XLD de BD (biplaca). Recuperdo de bd.com.
- Agar XLD. Recuperado de foodsafety.neogen.
- XLD Agar. Recuperado de f-soria.es/Inform.